簡(jiǎn)單介紹哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)的定義

   蛋白表達(dá)系統(tǒng)是指由宿主、外源基因、載體和輔助成分組成的體系。通過這個(gè)體系可以實(shí)現(xiàn)外源基因在宿主中表達(dá)的目的。一般由以下幾個(gè)部分組成：宿主表達(dá)蛋白的生物體。可以為細(xì)菌、酵母、植物細(xì)胞、動(dòng)物細(xì)胞等。由于各種生物的特性不同，適合表達(dá)蛋白的種類也不相同。載體載體的種類與宿主相匹配。根據(jù)宿主不同，分為原核（細(xì)菌）表達(dá)載體、酵母表達(dá)載體、植物表達(dá)載體、哺乳動(dòng)物表達(dá)載體、昆蟲表達(dá)載體等。載體中含有外源基因片段。通過載體介導(dǎo)，外源基因可以在宿主中表達(dá)。輔助成分有的表達(dá)系統(tǒng)中還包括了協(xié)助載體進(jìn)入宿主的輔助成分。比如昆蟲-桿狀病毒表達(dá)體系中的桿狀病毒。

　　哺乳動(dòng)物蛋白表達(dá)系統(tǒng)的優(yōu)勢(shì)能實(shí)現(xiàn)翻譯后修飾及正確的蛋白折疊復(fù)性：哺乳動(dòng)物為真核細(xì)胞，細(xì)胞器可以對(duì)蛋白正確折疊加工。表達(dá)水平高:載體可在哺乳動(dòng)物細(xì)胞中高表達(dá)重組蛋白，表達(dá)量可高達(dá)1-3g/L蛋白表達(dá)高效穩(wěn)定：高效啟動(dòng)子控制，穩(wěn)定表達(dá)，并可以選擇多種表達(dá)系統(tǒng)選項(xiàng)：瞬時(shí)表達(dá)、穩(wěn)定細(xì)胞株表達(dá)、營(yíng)養(yǎng)缺陷型細(xì)胞株表達(dá)(DHFR/GS)、大規(guī)模懸浮細(xì)胞表達(dá)等適合大規(guī)模蛋白表達(dá):常用的哺乳動(dòng)物表達(dá)宿主細(xì)胞（HEK293和CHO），使用懸浮細(xì)胞培養(yǎng)，可以在一個(gè)月內(nèi)可產(chǎn)生數(shù)克級(jí)蛋白。

　　當(dāng)然哺乳動(dòng)物表達(dá)系統(tǒng)也有它的劣勢(shì)：曾經(jīng)，使用哺乳動(dòng)物細(xì)胞表達(dá)重組蛋白質(zhì)的最大問題是是效率低，所表達(dá)的蛋白質(zhì)水平低。然而，諸如HEK293和CHO的細(xì)胞系已經(jīng)分別被開發(fā)為有效的瞬時(shí)和穩(wěn)定表達(dá)系統(tǒng)。方法原理是使用脂質(zhì)體、磷酸鈣或PEG作為轉(zhuǎn)染試劑瞬時(shí)轉(zhuǎn)染HEK293細(xì)胞。雖然瞬態(tài)表達(dá)相對(duì)容易和簡(jiǎn)單，但擴(kuò)大規(guī)模卻在技術(shù)上存在挑戰(zhàn)性。CHO細(xì)胞通常用于穩(wěn)定表達(dá)大量重組蛋白。